Calculadora ΔΔCt

Cómo calcular el cambio de expresión con ΔΔCt

1. Escribe los Ct del gen diana y del gen de referencia en las muestras tratada y control. Varias réplicas separadas por espacios se promedian.
2. Deja ambas eficiencias en 100% para el método 2^-ΔΔCt, o escribe las eficiencias medidas para usar el método de Pfaffl.
3. Aparece el cambio de expresión de la muestra tratada respecto al control, con ΔCt, ΔΔCt y el log2 del cambio.

Preguntas frecuentes

¿Cuál es la fórmula?

ΔCt = Ct diana − Ct referencia en cada muestra, ΔΔCt = ΔCt tratado − ΔCt control, y cambio de expresión = 2^-ΔΔCt.

¿Cuándo uso las eficiencias de los cebadores?

Cuando se alejan del 100% o difieren entre sí. La razón de Pfaffl es E diana^(Ct diana control − Ct diana tratado) ÷ E referencia^(Ct referencia control − Ct referencia tratado), con E = 1 + eficiencia. Con ambas al 100% da lo mismo que 2^-ΔΔCt.

¿Qué significa un cambio menor que 1?

Que el gen diana se expresa menos en la muestra tratada que en el control. Un cambio de 0,5 es un log2 de −1, la mitad de expresión.