Proteinkonzentration berechnen (A280)

So berechnest du die Proteinkonzentration aus A280

1. Gib den A280-Messwert, den Verdünnungsfaktor und die Schichtdicke ein.
2. Wähle, woher der Extinktionskoeffizient kommt: Füge die Proteinsequenz ein, gib den molaren Koeffizienten und das Molekulargewicht ein oder gib Abs 0,1 % ein.
3. Die Konzentration erscheint in mg/mL und, wenn das Molekulargewicht bekannt ist, in µM.

Häufige Fragen

Wie wird der Extinktionskoeffizient aus der Sequenz berechnet?

Nach Pace et al. (1995): 5.500 M⁻¹ cm⁻¹ pro Tryptophan, 1.490 pro Tyrosin und 125 pro Cystin (zwei Cysteine in einer Disulfidbrücke). Wähle Reduziert, wenn die Cysteine frei sind.

Was ist Abs 0,1 %?

Die Absorption bei 280 nm einer Lösung mit 1 mg/mL in einer 1-cm-Küvette, also der Extinktionskoeffizient geteilt durch das Molekulargewicht. Konzentration in mg/mL = A280 ÷ Abs 0,1 %.

Warum funktioniert es mit meinem Protein nicht?

Proteine ohne Tryptophan und Tyrosin absorbieren bei 280 nm fast nichts. Nimm einen Farbstofftest wie Bradford oder BCA, oder miss bei 205 nm.