タンパク質濃度の計算（A280）

A280 からタンパク質濃度を求める方法

1. A280 の測定値、希釈倍率、光路長を入力します。
2. 吸光係数の求め方を選びます。タンパク質配列を貼り付けるか、モル吸光係数と分子量、または Abs 0.1% を入力します。
3. 濃度が mg/mL で表示され、分子量がわかる場合は µM も表示されます。

よくある質問

配列から吸光係数をどう求めますか？

Pace ら (1995) の方法で、トリプトファン 1 個あたり 5,500 M⁻¹ cm⁻¹、チロシン 1 個あたり 1,490、シスチン（ジスルフィド結合したシステイン 2 個）1 個あたり 125 です。システインが遊離している場合は「還元型」を選びます。

Abs 0.1% とは？

1 mg/mL 溶液の 280 nm での吸光度（光路長 1 cm）で、吸光係数を分子量で割った値です。濃度 (mg/mL) = A280 ÷ Abs 0.1% です。

なぜ私のタンパク質では計算できないのですか？

トリプトファンもチロシンもないタンパク質は 280 nm でほとんど吸収しません。Bradford 法や BCA 法などの色素法を使うか、205 nm で測定してください。