Protein derişimi hesaplayıcı (A280)

A280’den protein derişimi nasıl hesaplanır

1. A280 okumasını, seyreltme faktörünü ve yol uzunluğunu yaz.
2. Sönüm katsayısının nereden geleceğini seç: protein dizisini yapıştır, molar katsayıyı ve molekül ağırlığını yaz ya da Abs %0,1 değerini yaz.
3. Derişim mg/mL cinsinden, molekül ağırlığı biliniyorsa µM ile birlikte görünür.

Sık sorulan sorular

Sönüm katsayısı diziden nasıl hesaplanıyor?

Pace ve ark. (1995) yöntemiyle: her triptofan için 5.500 M⁻¹ cm⁻¹, her tirozin için 1.490 ve her sistin (disülfit bağındaki sistein çifti) için 125. Sisteinler serbestse «İndirgenmiş»i seç.

Abs %0,1 nedir?

1 cm’lik bir küvetteki 1 mg/mL’lik bir çözeltinin 280 nm’deki absorbansı; sönüm katsayısının molekül ağırlığına bölümüdür. mg/mL cinsinden derişim = A280 ÷ Abs %0,1.

Neden proteinimi kullanamıyor?

Triptofan ya da tirozin içermeyen proteinler 280 nm’de neredeyse hiç soğurmaz. Bradford ya da BCA gibi bir boya testi kullan veya 205 nm’de ölç.