Spektrofotometre ve Beer-Lambert yasası simülatörü
Bu benzetimdeki denklemler
| A | absorbans | birimsiz; her A birimi ışığı on kat azaltır | |
|---|---|---|---|
| T | geçirgenlik | yalnızca çözücüden oluşan bir köre göre örnekten geçen ışık payı |
Mevcut değerlerle:
| ε | bu dalga boyunda soğurganlık | tuzlar için M⁻¹ cm⁻¹; protein ve DNA için cm başına mg/mL ya da µg/mL başına | |
|---|---|---|---|
| l | Yol uzunluğu l | ışığın çözelti içinde aldığı yol | |
| c | derişim | Derişim (aralığın %'si; değer sonuçlarda) değerinden |
Mevcut değerlerle:
| m, b | standart eğrinin eğimi ve kesişimi | eklediğin standartlara en küçük kareler ile uydurulur; R² ne kadar düz olduklarını söyler |
|---|
Mevcut değerlerle:
| s | kaçak ışık | yine de dedektöre ulaşan başka dalga boylarındaki ışık; bir cihazın okuyabildiği absorbansı −log₁₀ s = 3 civarında sınırlar |
|---|
Mevcut değerlerle:
Spektrofotometre simülatörü nasıl kullanılır
- Bir çözelti, bir dalga boyu ve bir derişim seç. Lambadan gelen ışık monokromatörde renklere ayrılır, dar bir bant yarıktan geçer, küvetten geçer ve absorbansı yalnızca çözücüden oluşan bir körle karşılaştırarak okuyan dedektöre ulaşır. Çözeltinin en çok soğurduğu dalga boyuna atlamak için «Tepeye git»e bas.
- Beer-Lambert yasasının söylediği gibi absorbansın derişim ve yol uzunluğuyla orantılı olarak yükseldiğini ve çözeltinin renginin koyulaştığını izle. Grafik soğurma spektrumunun tamamını gösterir: ölçülen eğri, yalnızca Beer-Lambert’in yanında. Absorbans 2 ya da 3’ü geçene kadar derişimi artır; ölçülen eğri kaçak ışık yüzünden düzleşir. Okumaların başka nasıl bozulduğunu görmek için dar permanganat tepelerinde yarığı genişlet ya da morötesinde plastik bir küvet seç.
- Bir standart eğri kur: birkaç derişim ayarla, her seferinde «Bu okumayı standart eğriye ekle»ye bas, sonra «Bilinmeyeni ölç»e bas. Uydurulan doğru bilinmeyenin derişimini verir; sonuçlar gerçekte ne olduğunu da gösterir. Beer-Lambert yasası hesaplayıcı ve Standart eğri hesaplayıcı aynısını kendi okumalarınla yapar.
Sık sorulan sorular
Beer-Lambert yasası nedir?
A = ε l c: absorbans, maddenin o dalga boyundaki soğurma katsayısı çarpı ışığın çözeltideki yol uzunluğu çarpı derişime eşittir. Absorbans logaritmik olduğu için A = 1 ışığın %10’unun, A = 2 ise %1’inin geçtiği anlamına gelir. Spektrofotometrenin derişim ölçmesini sağlayan bu yasadır.
Neden tepe dalga boyunda ölçülür?
λmaks’ta absorbans en büyüktür, bu yüzden ölçüm en duyarlıdır; eğri orada düzdür, bu yüzden dalga boyundaki küçük bir hata ya da geniş bir yarık okumayı en az değiştirir. DNA’nın 260 nm’de, proteinin 280 nm’de ölçülmesinin nedeni budur.
Absorbans neden yaklaşık 1,5’in altında kalmalı?
A = 2’nin üstünde ışığın %1’inden azı dedektöre ulaşır; bu yüzden kaçak ışık (sızan başka dalga boylarındaki ışık) ve dedektör gürültüsü ölçülenin büyük bir kısmı olur. Okuma gerçek değerin altında düzleşir. Örneği seyrelt ve geri çarp.
Neden standart eğriye ihtiyacım var?
Gerçek cihazlar ve gerçek çözeltiler kusursuz değildir ve belirli bir örnek için ε bilinmeyebilir. Bilinen derişimdeki standartları aynı koşullarda ölçmek cihazı kalibre eder ve yanıtın doğrusal olduğunu denetler; bilinmeyen sonra uydurulan doğrudan okunur. Ona yalnızca standartların aralığı içinde güven.
WebGL’nin kapalı olduğunu söylüyor.
3B görünüm, güncel her tarayıcıda bulunan WebGL’ye ihtiyaç duyar. Tarayıcı ayarlarında donanım hızlandırma kapatılmışsa ya da grafik sürücüsü çok eskiyse kapalı olabilir. Donanım hızlandırmayı aç ya da başka bir tarayıcı dene.
Bir şey yükleniyor mu?
Hayır. Simülasyonu WebGL ile kendi tarayıcın çizer; hiçbir yere hiçbir şey gönderilmez ve sayfa yüklendikten sonra çevrimdışı da çalışmaya devam eder.