Simulator Spektrofotometer dan Hukum Beer-Lambert
Persamaan dalam simulasi ini
| A | absorbans | tanpa satuan; setiap satu satuan A melemahkan cahaya sepuluh kali | |
|---|---|---|---|
| T | transmitans | bagian cahaya yang menembus sampel, dibandingkan dengan blanko berisi pelarut saja |
Dengan nilai saat ini:
| ε | absorptivitas pada panjang gelombang ini | dalam M⁻¹ cm⁻¹ untuk garam; untuk protein dan DNA, per mg/mL atau per µg/mL per cm | |
|---|---|---|---|
| l | Panjang lintasan l | jarak yang ditempuh cahaya melalui larutan | |
| c | konsentrasi | dari Konsentrasi (% dari rentang; nilainya ada di hasil) |
Dengan nilai saat ini:
| m, b | kemiringan dan titik potong kurva standar | dicocokkan dengan kuadrat terkecil pada standar yang kamu tambahkan; R² menunjukkan seberapa lurus letaknya |
|---|
Dengan nilai saat ini:
| s | cahaya sesat | cahaya panjang gelombang lain yang tetap sampai ke detektor; ini membatasi absorbans yang bisa dibaca alat di sekitar −log₁₀ s = 3 |
|---|
Dengan nilai saat ini:
Cara memakai simulator spektrofotometer
- Pilih larutan, panjang gelombang, dan konsentrasi. Monokromator memecah cahaya lampu menjadi warna-warna, pita sempit lewat melalui celah, menembus kuvet, dan sampai ke detektor, yang membaca absorbansi terhadap blanko berisi pelarut saja. Klik Ke puncak untuk melompat ke panjang gelombang yang paling banyak diserap larutan.
- Lihat absorbansi naik sebanding dengan konsentrasi dan panjang lintasan, sesuai hukum Beer-Lambert, dan warna larutan makin pekat. Grafik menunjukkan spektrum serapan lengkap: kurva terukur di samping kurva Beer-Lambert murni. Naikkan konsentrasi sampai absorbansi melewati 2 atau 3 dan kurva terukur mendatar akibat cahaya sesat; lebarkan celah pada puncak-puncak sempit permanganat, atau pilih kuvet plastik di daerah ultraungu, untuk melihat cara lain pembacaan menjadi keliru.
- Buat kurva standar: atur beberapa konsentrasi dan klik Tambahkan bacaan ini ke kurva standar setiap kali, lalu Ukur sampel yang tidak diketahui. Garis hasil pencocokan memberi konsentrasinya, dan hasilnya juga menunjukkan nilai sebenarnya. Kalkulator Hukum Beer-Lambert dan Kalkulator Kurva Standar melakukan hal yang sama dengan bacaanmu sendiri.
Pertanyaan umum
Apa itu hukum Beer-Lambert?
A = ε l c: absorbansi sama dengan absorptivitas zat pada panjang gelombang itu, dikali panjang lintasan cahaya di dalam larutan, dikali konsentrasi. Karena absorbansi bersifat logaritmik, A = 1 berarti 10% cahaya lolos, dan A = 2 berarti 1%. Hukum inilah yang memungkinkan spektrofotometer mengukur konsentrasi.
Mengapa mengukur di puncak?
Pada λmax absorbansi paling besar, sehingga pengukuran paling peka, dan kurvanya datar di sana, sehingga sedikit kesalahan panjang gelombang atau celah yang lebar tidak banyak mengubah bacaan. Itulah sebabnya DNA diukur pada 260 nm dan protein pada 280 nm.
Mengapa absorbansi sebaiknya di bawah sekitar 1,5?
Di atas A = 2, kurang dari 1% cahaya sampai ke detektor, jadi cahaya sesat (cahaya dari panjang gelombang lain yang ikut lolos) dan derau detektor menjadi bagian besar dari yang terukur. Bacaan mendatar di bawah nilai sebenarnya. Encerkan sampel lalu kalikan kembali.
Untuk apa kurva standar?
Alat dan larutan sungguhan tidak sempurna, dan ε sering tidak diketahui untuk sampel tertentu. Mengukur standar dengan konsentrasi yang diketahui dalam kondisi yang sama mengkalibrasi alat dan memastikan responsnya linear; sampel yang tidak diketahui lalu dibaca dari garis hasil pencocokan. Percayai hasilnya hanya di dalam rentang standar.
Katanya WebGL dimatikan.
Tampilan 3D memerlukan WebGL, yang dimiliki semua browser terkini. WebGL bisa nonaktif jika akselerasi perangkat keras dimatikan di pengaturan browser, atau karena driver grafis yang sangat lama. Nyalakan akselerasi perangkat keras, atau coba browser lain.
Apakah ada yang diunggah?
Tidak. Simulasi digambar oleh browser Anda sendiri dengan WebGL; tidak ada yang dikirim ke mana pun, dan simulasi tetap berjalan offline setelah halaman dimuat.