Simulador de espectrofotómetro y ley de Beer-Lambert
Ecuaciones de esta simulación
| A | absorbancia | sin unidades; cada unidad de A reduce la luz diez veces | |
|---|---|---|---|
| T | transmitancia | la parte de la luz que atraviesa la muestra, comparada con un blanco de solo disolvente |
Con los valores actuales:
| ε | absortividad a esta longitud de onda | en M⁻¹ cm⁻¹ para las sales; para la proteína y el ADN, por mg/mL o por µg/mL y por cm | |
|---|---|---|---|
| l | Longitud del camino óptico l | la distancia que recorre la luz a través de la disolución | |
| c | concentración | de Concentración (% del intervalo; el valor está en los resultados) |
Con los valores actuales:
| m, b | pendiente y ordenada en el origen de la curva de calibrado | ajustadas por mínimos cuadrados a los patrones que añades; R² indica lo rectos que quedan |
|---|
Con los valores actuales:
| s | luz parásita | luz de otras longitudes de onda que llega igualmente al detector; limita la absorbancia que puede leer un aparato a cerca de −log₁₀ s = 3 |
|---|
Con los valores actuales:
Cómo usar el simulador de espectrofotómetro
- Elige una disolución, una longitud de onda y una concentración. El monocromador separa en colores la luz de la lámpara, una banda estrecha pasa por la rendija, atraviesa la cubeta y llega al detector, que lee la absorbancia frente a un blanco de solo disolvente. Pulsa Ir al máximo para saltar a la longitud de onda que más absorbe la disolución.
- Mira cómo la absorbancia sube en proporción a la concentración y al camino óptico, como dice la ley de Beer-Lambert, y cómo se oscurece el color de la disolución. La gráfica muestra el espectro de absorción completo: la curva medida junto a la de Beer-Lambert sola. Sube la concentración hasta que la absorbancia pase de 2 o 3 y la curva medida se aplane por la luz parásita; ensancha la rendija en los picos estrechos del permanganato, o elige una cubeta de plástico en el ultravioleta, para ver otras formas de que las lecturas fallen.
- Construye una curva de calibrado: pon varias concentraciones y pulsa cada vez Añadir esta lectura a la curva de calibrado; luego Medir la muestra desconocida. La recta ajustada da su concentración, y los resultados muestran también cuál era en realidad. La Calculadora de la ley de Beer-Lambert y la Calculadora de curva estándar hacen lo mismo con tus propias lecturas.
Preguntas frecuentes
¿Qué es la ley de Beer-Lambert?
A = ε l c: la absorbancia es igual a la absortividad de la sustancia a esa longitud de onda, por el camino que recorre la luz en la disolución, por la concentración. Como la absorbancia es logarítmica, A = 1 significa que pasa el 10 % de la luz y A = 2, el 1 %. Esta ley es la que permite a un espectrofotómetro medir concentraciones.
¿Por qué medir en el máximo?
En λmax la absorbancia es mayor, así que la medida es más sensible, y la curva es plana allí, de modo que un pequeño error en la longitud de onda o una rendija ancha cambian menos la lectura. Por eso el ADN se mide a 260 nm y las proteínas a 280 nm.
¿Por qué la absorbancia debería quedarse por debajo de 1,5 más o menos?
Por encima de A = 2 llega al detector menos del 1 % de la luz, así que la luz parásita (luz de otras longitudes de onda que se cuela) y el ruido del detector pasan a ser una parte grande de lo medido. La lectura se aplana por debajo del valor real. Diluye la muestra y multiplica después.
¿Para qué necesito una curva de calibrado?
Los aparatos y las disoluciones reales no son perfectos, y muchas veces no se conoce ε para una muestra concreta. Medir patrones de concentración conocida en las mismas condiciones calibra el aparato y comprueba que la respuesta es lineal; la desconocida se lee después en la recta ajustada. Fíate del resultado solo dentro del intervalo de los patrones.
Dice que WebGL está desactivado.
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¿Se sube algo?
No. La simulación la dibuja tu propio navegador con WebGL; no se envía nada a ningún sitio y sigue funcionando sin conexión una vez cargada la página.