स्पेक्ट्रोफ़ोटोमीटर और बियर-लैम्बर्ट नियम सिम्युलेटर
इस सिमुलेशन के समीकरण
| A | अवशोषकता | बिना इकाई; A की हर इकाई प्रकाश को दस गुना घटाती है | |
|---|---|---|---|
| T | पारगम्यता | नमूने से गुज़रने वाले प्रकाश का हिस्सा, सिर्फ़ विलायक वाले ब्लैंक से तुलना करके |
मौजूदा मानों के साथ:
| ε | इस तरंगदैर्ध्य पर अवशोषण गुणांक | लवणों के लिए M⁻¹ cm⁻¹ में; प्रोटीन और DNA के लिए प्रति mg/mL या प्रति µg/mL प्रति cm | |
|---|---|---|---|
| l | पथ लंबाई l | घोल में प्रकाश द्वारा तय दूरी | |
| c | सांद्रता | सांद्रता (रेंज का %; मान नतीजों में है) से |
मौजूदा मानों के साथ:
| m, b | मानक वक्र का ढलान और अंतःखंड | आपके जोड़े मानकों पर न्यूनतम वर्ग विधि से फ़िट; R² बताता है कि वे कितनी सीधी रेखा में हैं |
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मौजूदा मानों के साथ:
| s | भटका प्रकाश | दूसरी तरंगदैर्ध्य का प्रकाश जो फिर भी डिटेक्टर तक पहुँचता है; यह उपकरण की पढ़ी जा सकने वाली अवशोषकता को लगभग −log₁₀ s = 3 पर सीमित करता है |
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मौजूदा मानों के साथ:
स्पेक्ट्रोफ़ोटोमीटर सिम्युलेटर का उपयोग कैसे करें
- एक विलयन, एक तरंगदैर्ध्य और एक सांद्रता चुनें। मोनोक्रोमेटर लैंप के प्रकाश को रंगों में बाँटता है, एक संकरी पट्टी स्लिट से गुज़रकर क्यूवेट को पार करती है और डिटेक्टर तक पहुँचती है, जो सिर्फ़ विलायक वाले ब्लैंक के मुकाबले अवशोषकता पढ़ता है। विलयन जिस तरंगदैर्ध्य को सबसे ज़्यादा सोखता है, वहाँ पहुँचने के लिए शिखर पर जाएँ दबाएँ।
- देखें कि अवशोषकता सांद्रता और पथ लंबाई के अनुपात में बढ़ती है, जैसा बियर-लैम्बर्ट नियम कहता है, और विलयन का रंग गहरा होता जाता है। ग्राफ़ पूरा अवशोषण स्पेक्ट्रम दिखाता है: नापा गया वक्र और उसके साथ अकेला बियर-लैम्बर्ट वक्र। सांद्रता तब तक बढ़ाएँ जब तक अवशोषकता 2 या 3 से ऊपर न चली जाए और भटके प्रकाश के कारण नापा गया वक्र चपटा न हो जाए; परमैंगनेट के संकरे शिखरों पर स्लिट चौड़ी करें, या पराबैंगनी में प्लास्टिक क्यूवेट चुनें, ताकि पाठ गलत होने के दूसरे तरीके दिखें।
- मानक वक्र बनाएँ: कई सांद्रताएँ सेट करें और हर बार यह पाठ मानक वक्र में जोड़ें दबाएँ, फिर अज्ञात नमूना नापें। फ़िट की गई रेखा उसकी सांद्रता देती है, और परिणाम यह भी दिखाते हैं कि असल में वह कितनी थी। बीयर-लैम्बर्ट नियम कैलकुलेटर और स्टैंडर्ड कर्व कैलकुलेटर आपके अपने पाठों के साथ यही करते हैं।
अक्सर पूछे जाने वाले सवाल
बियर-लैम्बर्ट नियम क्या है?
A = ε l c: अवशोषकता बराबर है उस तरंगदैर्ध्य पर पदार्थ की अवशोषण क्षमता, गुणा विलयन में प्रकाश का पथ, गुणा सांद्रता। अवशोषकता लघुगणकीय है, इसलिए A = 1 का मतलब है 10% प्रकाश गुज़रता है, और A = 2 का 1%। यही नियम स्पेक्ट्रोफ़ोटोमीटर को सांद्रता नापने देता है।
शिखर पर क्यों नापें?
λmax पर अवशोषकता सबसे ज़्यादा होती है, इसलिए माप सबसे संवेदनशील होता है, और वहाँ वक्र सपाट होता है, इसलिए तरंगदैर्ध्य में छोटी गलती या चौड़ी स्लिट पाठ को कम बदलती है। इसीलिए DNA 260 nm पर और प्रोटीन 280 nm पर नापे जाते हैं।
अवशोषकता लगभग 1.5 से नीचे क्यों रहनी चाहिए?
A = 2 से ऊपर 1% से कम प्रकाश डिटेक्टर तक पहुँचता है, इसलिए भटका प्रकाश (दूसरी तरंगदैर्ध्य का प्रकाश जो फिर भी पहुँच जाता है) और डिटेक्टर का शोर नापी गई चीज़ का बड़ा हिस्सा बन जाते हैं। पाठ असली मान से नीचे चपटा हो जाता है। नमूना तनु करें और बाद में गुणा करें।
मानक वक्र की ज़रूरत क्यों है?
असली उपकरण और विलयन पूर्ण नहीं होते, और किसी खास नमूने का ε अक्सर पता नहीं होता। उन्हीं हालात में ज्ञात सांद्रता वाले मानक नापने से उपकरण अंशांकित होता है और पता चलता है कि प्रतिक्रिया रैखिक है; फिर अज्ञात को फ़िट की गई रेखा से पढ़ा जाता है। परिणाम पर सिर्फ़ मानकों की सीमा के अंदर भरोसा करें।
यह कहता है कि WebGL बंद है।
3D दृश्य के लिए WebGL चाहिए, जो हर आधुनिक ब्राउज़र में होता है। ब्राउज़र सेटिंग में हार्डवेयर एक्सेलरेशन बंद होने या बहुत पुराने ग्राफ़िक्स ड्राइवर से यह बंद हो सकता है। हार्डवेयर एक्सेलरेशन चालू करें या दूसरा ब्राउज़र आज़माएँ।
क्या कुछ अपलोड होता है?
नहीं। सिमुलेशन आपका अपना ब्राउज़र WebGL से बनाता है; कहीं कुछ नहीं भेजा जाता, और पेज लोड होने के बाद यह ऑफ़लाइन भी चलता रहता है।