Калькулятор концентрации белка (A280)

Как рассчитать концентрацию белка по A280

1. Введите показание A280, коэффициент разведения и длину оптического пути.
2. Выберите источник коэффициента экстинкции: вставьте последовательность белка, введите молярный коэффициент и молекулярную массу или введите Abs 0,1%.
3. Концентрация появится в мг/мл, а если известна молекулярная масса — и в мкМ.

Частые вопросы

Как рассчитывается коэффициент экстинкции по последовательности?

Методом Pace et al. (1995): 5500 М⁻¹ см⁻¹ на каждый триптофан, 1490 на каждый тирозин и 125 на каждый цистин (пару цистеинов в дисульфидной связи). Выберите «Восстановлены», если цистеины свободны.

Что такое Abs 0,1%?

Оптическая плотность при 280 нм раствора 1 мг/мл в кювете 1 см, то есть коэффициент экстинкции, делённый на молекулярную массу. Концентрация в мг/мл = A280 ÷ Abs 0,1%.

Почему он не подходит для моего белка?

Белки без триптофана и тирозина почти не поглощают при 280 нм. Используйте метод с красителем, например Брэдфорда или BCA, или измеряйте при 205 нм.