Калькулятор ΔΔCt

Как рассчитать кратность изменения методом ΔΔCt

1. Введите значения Ct целевого и референсного гена для обработанного и контрольного образцов. Несколько повторов через пробел усредняются.
2. Оставьте обе эффективности 100% для метода 2^-ΔΔCt или введите измеренные эффективности, чтобы использовать метод Пфаффла.
3. Появится кратность изменения обработанного образца относительно контроля с ΔCt, ΔΔCt и log2 кратности.

Частые вопросы

Какая формула?

ΔCt = Ct целевого − Ct референсного для каждого образца, ΔΔCt = ΔCt обработанного − ΔCt контроля, а кратность изменения = 2^-ΔΔCt.

Когда учитывать эффективность праймеров?

Когда она отличается от 100% или различается между генами. Отношение Пфаффла — E целевого^(Ct целевого в контроле − Ct целевого в обработанном) ÷ E референсного^(Ct референсного в контроле − Ct референсного в обработанном), где E = 1 + эффективность. При 100% для обоих оно совпадает с 2^-ΔΔCt.

Что значит кратность изменения меньше 1?

Целевой ген экспрессируется в обработанном образце слабее, чем в контроле. Кратность 0,5 — это log2 кратности −1, вдвое меньшая экспрессия.