La formule
volume à ajouter = masse dans le flacon ÷ concentration cible
Gardez des unités cohérentes : mg ÷ mg/mL donne des mL, et µg ÷ µg/µL donne des µL.
Exemples
- 5 mg de peptide à 2 mg/mL : 5 ÷ 2 = 2,5 mL.
- 100 µg d'anticorps à 0,5 mg/mL (0,5 µg/µL) : 100 ÷ 0,5 = 200 µL.
- 1 mg d'un peptide de 1 500 g/mol à 1 mM : 0,001 g ÷ 1 500 g/mol = 0,667 µmol, et 0,667 µmol ÷ 1 mmol/L = 667 µL.
Vérifiez ce que contient vraiment le flacon
La poudre d'un peptide de synthèse n'est pas que du peptide. Les contre-ions comme le trifluoroacétate et l'eau liée représentent souvent 10 % à 30 % du poids : le certificat d'analyse peut indiquer une teneur nette en peptide de 80 %, par exemple. Multipliez la masse brute par cette fraction avant de calculer : 5 mg à 80 % font 4 mg de peptide. Pour les protéines, vérifiez la quantité sur la fiche technique et, après dissolution, confirmez la concentration par l'absorbance à 280 nm.
Choisir le solvant
- Suivez d'abord la fiche technique. La plupart des protéines et des anticorps se reprennent dans l'eau ou dans le tampon dont ils ont été lyophilisés.
- Les peptides riches en résidus basiques (K, R, H) se dissolvent mieux dans un peu d'acide acétique dilué ; les peptides acides (D, E), dans un peu de bicarbonate d'ammonium dilué.
- Les peptides très hydrophobes peuvent demander d'abord un petit volume de DMSO, puis une dilution lente dans le tampon. Évitez le DMSO avec les peptides contenant de la cystéine ou de la méthionine, qu'il peut oxyder.
Étapes
- Laissez le flacon revenir à température ambiante avant de l'ouvrir, pour que l'humidité ne se condense pas sur la poudre.
- Centrifugez-le brièvement pour que toute la poudre soit au fond.
- Ajoutez le solvant lentement le long de la paroi du flacon.
- Faites tourner ou rouler doucement et laissez reposer 15 à 30 minutes. Ne passez pas les protéines au vortex à fond : elles peuvent se dénaturer et mousser.
- Si la solution reste trouble, un court bain à ultrasons peut aider pour les peptides. Les particules restantes ne sont pas dissoutes : centrifugez-les et mesurez la concentration du surnageant.
Conserver
Répartissez la solution en aliquotes à usage unique et congelez-les à −20 °C ou −80 °C, car chaque cycle de congélation et décongélation peut faire perdre de l'activité. Les protéines diluées sous environ 0,1 mg/mL adhèrent aux parois des tubes ; une protéine porteuse comme la BSA à 0,1 % l'évite si elle ne gêne pas l'expérience.
Calculateurs
Le Calcul de reconstitution donne le volume pour une concentration cible, ou la concentration à partir d'un volume, en unités de masse ou molaires. Vérifiez le résultat avec le Calcul de la concentration en protéines (A280) et préparez les dilutions de travail avec le Calcul de solution mère.