분자생물학 실험 계산: 학습 가이드

핵심 개념

분자 생물학 실험대는 몇 가지 계산으로 돌아간다. 튜브에 DNA가 얼마나 있는지, 어떻게 희석하는지, 인서트를 얼마나 연결할지, 프라이머가 몇 도에서 결합하는지이다.

• 이중 가닥 DNA는 A₂₆₀ = 1일 때 약 50 µg/mL이다. 희석 배수를 곱하고, RNA는 40, 단일 가닥 DNA는 33을 곱한다.
• 짧은 프라이머의 월리스 규칙은 Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C)(°C)이다. 한 쌍 중 더 낮은 Tm보다 몇 도 아래에서 어닐링한다.
• 연결 반응에서 인서트의 질량 = 몰비 × 벡터의 질량 × (인서트 길이 ÷ 벡터 길이)이다.
• 연속 희석은 배수를 곱하므로 1:10을 세 번 하면 1:1000이다. 사본 수 = 질량 × 6.022 × 10²³ ÷ (길이 × 660 × 10⁹)이며 질량은 나노그램이다.

핵심 식

• conc (µg/mL) = A₂₆₀ × 50 × dilution
• Tm = 2(A+T) + 4(G+C)
• insert ng = ratio × vector ng × insert length ÷ vector length
• copies = mass × 6.022×10²³ ÷ (length × 660 × 10⁹)

풀이 예제

DNA 시료를 1:10으로 희석해 A₂₆₀ = 0.50이면 원액은 0.50 × 50 × 10 = 250 µg/mL이다. A 또는 T가 10개, G 또는 C가 10개인 20-mer 프라이머의 Tm = 2 × 10 + 4 × 10 = 60 °C이다. 50 ng의 3 kb 벡터와 몰비 3:1인 1 kb 인서트라면 인서트 = 3 × 50 × (1 ÷ 3) = 50 ng이다.

자주 하는 실수

• A₂₆₀ 측정값을 농도로 바꿀 때 희석 배수를 잊는 것.
• 몰비를 묻는데 질량비를 쓰는 것.
• 염 보정식이 필요한 긴 프라이머에 월리스 규칙을 쓰는 것.

연습

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