আণবিক জীববিজ্ঞান ল্যাবের হিসাব: পাঠ নির্দেশিকা

মূল ধারণা

আণবিক জীববিদ্যার কাজের টেবিল অল্প কিছু হিসাবে চলে: টিউবে কতটা DNA আছে, কীভাবে লঘু করতে হয়, কতটা ইনসার্ট জুড়তে হবে এবং প্রাইমার কত তাপমাত্রায় যুক্ত হয়।

• A₂₆₀ = 1-এ দ্বিসূত্রক DNA প্রায় 50 µg/mL। লঘুকরণ গুণক দিয়ে গুণ করুন, আর RNA-র জন্য 40 ও একসূত্রক DNA-র জন্য 33 দিয়ে।
• ছোট প্রাইমারের জন্য ওয়ালেস নিয়ম Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C), °C-এ। জোড়ার কম Tm-এর কয়েক ডিগ্রি নিচে অ্যানিলিং করুন।
• লাইগেশনের জন্য ইনসার্টের ভর = মোলার অনুপাত × ভেক্টরের ভর × (ইনসার্টের দৈর্ঘ্য ÷ ভেক্টরের দৈর্ঘ্য)।
• ক্রমিক লঘুকরণ গুণকগুলো গুণ করে, তাই তিনটি 1:10 ধাপ 1:1000 দেয়। প্রতিলিপির সংখ্যা = ভর × 6.022 × 10²³ ÷ (দৈর্ঘ্য × 660 × 10⁹), ভর ন্যানোগ্রামে।

মূল সমীকরণ

• conc (µg/mL) = A₂₆₀ × 50 × dilution
• Tm = 2(A+T) + 4(G+C)
• insert ng = ratio × vector ng × insert length ÷ vector length
• copies = mass × 6.022×10²³ ÷ (length × 660 × 10⁹)

সমাধান করা উদাহরণ

একটি DNA নমুনার 1:10 লঘুকরণে A₂₆₀ = 0.50, তাই মূল দ্রবণ 0.50 × 50 × 10 = 250 µg/mL। 10টি A বা T এবং 10টি G বা C-যুক্ত 20-মার প্রাইমারের Tm = 2 × 10 + 4 × 10 = 60 °C। 50 ng-এর 3 kb ভেক্টর ও 3:1 মোলার অনুপাতে 1 kb ইনসার্টের জন্য ইনসার্ট = 3 × 50 × (1 ÷ 3) = 50 ng।

সাধারণ ভুল

• A₂₆₀ পাঠকে ঘনমাত্রায় রূপান্তর করার সময় লঘুকরণ গুণক ভুলে যাওয়া।
• মোলার অনুপাত চাইলে ভরের অনুপাত ব্যবহার করা।
• লবণ-সংশোধিত সূত্র দরকার এমন লম্বা প্রাইমারে ওয়ালেস নিয়ম ব্যবহার করা।

অনুশীলন

এই বিষয়ের অনুশীলন প্রশ্ন দিয়ে নিজেকে যাচাই করুন: আণবিক জীববিজ্ঞান ল্যাবের হিসাব