Cálculos de laboratorio de biología molecular: guía de estudio

Ideas clave

El banco de biología molecular funciona con un pequeño conjunto de cálculos: cuánto ADN hay en un tubo, cómo diluirlo, cuánto inserto ligar y a qué temperatura se hibrida un cebador.

• El ADN bicatenario con A₂₆₀ = 1 es de unos 50 µg/mL. Multiplica por el factor de dilución, y por 40 para ARN y 33 para ADN monocatenario.
• La regla de Wallace para cebadores cortos es Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C), en °C. Hibrida unos grados por debajo de la menor Tm del par.
• Para la ligación, masa de inserto = relación molar × masa de vector × (longitud del inserto ÷ longitud del vector).
• Una dilución seriada multiplica los factores, así que tres pasos 1:10 dan 1:1000. Número de copias = masa × 6,022 × 10²³ ÷ (longitud × 660 × 10⁹), con la masa en nanogramos.

Ecuaciones clave

• conc (µg/mL) = A₂₆₀ × 50 × dilution
• Tm = 2(A+T) + 4(G+C)
• insert ng = ratio × vector ng × insert length ÷ vector length
• copies = mass × 6.022×10²³ ÷ (length × 660 × 10⁹)

Ejemplo resuelto

Una dilución 1:10 de una muestra de ADN da A₂₆₀ = 0,50, así que la muestra original es 0,50 × 50 × 10 = 250 µg/mL. Un cebador de 20 nucleótidos con 10 A o T y 10 G o C tiene Tm = 2 × 10 + 4 × 10 = 60 °C. Para un vector de 3 kb a 50 ng y un inserto de 1 kb con relación molar 3:1, inserto = 3 × 50 × (1 ÷ 3) = 50 ng.

Errores comunes

• Olvidar el factor de dilución al convertir una lectura de A₂₆₀ en concentración.
• Usar una relación en masa cuando se pide una relación molar.
• Usar la regla de Wallace para cebadores largos, donde hacen falta fórmulas ajustadas por sal.

Práctica

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