La fórmula
La eficiencia de transformación es el número de colonias que obtendrías por microgramo de ADN plasmídico si sembraras todo:
eficiencia (ufc/µg) = colonias × (volumen total ÷ volumen sembrado) × factor de dilución ÷ µg de ADN
Se mide con una cantidad conocida de un plásmido control sin cortar y superenrollado, como pUC19, porque el resultado depende tanto del plásmido como de las células.
Un ejemplo resuelto
Añades 10 pg (0,00001 µg) de pUC19 a 50 µL de células competentes, añades 950 µL de SOC tras el choque térmico (1.000 µL en total) y siembras 100 µL de una dilución 1:10. Al día siguiente hay 45 colonias.
- Fracción sembrada: 100 ÷ 1.000 = 0,1, así que multiplica por 10.
- Dilución: 1:10, así que multiplica por 10 otra vez.
- Colonias por transformación: 45 × 10 × 10 = 4.500.
- Por µg: 4.500 ÷ 0,00001 = 4,5 × 108 ufc/µg.
¿Qué es un buen número?
- Células quimiocompetentes caseras: de 106 a 107 ufc/µg.
- Células quimiocompetentes comerciales: de 108 a 109.
- Células electrocompetentes: de 109 a 1010.
Una ligación da muchas menos colonias por µg que el plásmido control, a menudo entre cien y mil veces menos, porque el ADN ligado es en su mayoría lineal o relajado y el tampón de ligación inhibe la transformación.
Por qué baja la eficiencia
Demasiado ADN (más de unos 100 ng por 50 µL de células) satura las células y baja el número por µg. Las sales, el etanol o el tampón de ligasa en el ADN, las células que se templaron antes del choque térmico, las células descongeladas y vueltas a congelar y saltarse la recuperación reducen la eficiencia. Los plásmidos grandes transforman peor que los pequeños.
Calculadoras
La Calculadora de eficiencia de transformación hace la aritmética a partir de colonias, ADN, volúmenes y dilución. Comprueba la cantidad de ADN con la Calculadora de concentración de ADN y convierte nanogramos en moléculas con la Calculadora de número de copias de ADN.