रूपांतरण दक्षता कैसे निकालें

फ़ॉर्मूला

रूपांतरण दक्षता वह कॉलोनी संख्या है जो सब कुछ प्लेट करने पर प्लाज़्मिड DNA के प्रति माइक्रोग्राम मिलती:

दक्षता (cfu/µg) = कॉलोनियाँ × (कुल आयतन ÷ प्लेट किया आयतन) × डाइल्यूशन फ़ैक्टर ÷ DNA के µg

इसे pUC19 जैसे बिना कटे, सुपरकॉइल्ड नियंत्रण प्लाज़्मिड की ज्ञात मात्रा से मापा जाता है, क्योंकि नतीजा कोशिकाओं जितना ही प्लाज़्मिड पर निर्भर करता है।

हल किया उदाहरण

आप 50 µL कॉम्पिटेंट कोशिकाओं में 10 pg (0.00001 µg) pUC19 डालते हैं, हीट शॉक के बाद 950 µL SOC मिलाते हैं (कुल 1,000 µL), और 1:10 डाइल्यूशन का 100 µL प्लेट करते हैं। अगले दिन 45 कॉलोनियाँ हैं।

1. प्लेट किया अंश: 100 ÷ 1,000 = 0.1, इसलिए 10 से गुणा करें।
2. डाइल्यूशन: 1:10, इसलिए फिर 10 से गुणा करें।
3. प्रति रूपांतरण कॉलोनियाँ: 45 × 10 × 10 = 4,500।
4. प्रति µg: 4,500 ÷ 0.00001 = 4.5 × 10⁸ cfu/µg।

अच्छा अंक क्या है?

• घर में बनाई रासायनिक कॉम्पिटेंट कोशिकाएँ: 10⁶ से 10⁷ cfu/µg।
• व्यावसायिक रासायनिक कॉम्पिटेंट कोशिकाएँ: 10⁸ से 10⁹।
• इलेक्ट्रो-कॉम्पिटेंट कोशिकाएँ: 10⁹ से 10¹⁰।

लाइगेशन से नियंत्रण प्लाज़्मिड की तुलना में प्रति µg बहुत कम कॉलोनियाँ मिलती हैं, अक्सर सौ से हज़ार गुना कम, क्योंकि लाइगेट हुआ DNA ज़्यादातर रैखिक या ढीला होता है और लाइगेशन बफ़र रूपांतरण को रोकता है।

दक्षता क्यों गिरती है

बहुत ज़्यादा DNA (50 µL कोशिकाओं पर लगभग 100 ng से अधिक) कोशिकाओं को संतृप्त कर देता है और प्रति µg अंक घटाता है। DNA में नमक, इथेनॉल या लाइगेज़ बफ़र, हीट शॉक से पहले गर्म हो गई कोशिकाएँ, पिघलाकर दोबारा जमाई कोशिकाएँ, और रिकवरी चरण छोड़ देना, सब दक्षता घटाते हैं। बड़े प्लाज़्मिड छोटों से कम दक्षता से रूपांतरित होते हैं।

कैलकुलेटर

रूपांतरण दक्षता कैलकुलेटर कॉलोनियों, DNA, आयतनों और डाइल्यूशन से गणना करता है। DNA की मात्रा DNA सांद्रता कैलकुलेटर से जाँचें, और नैनोग्राम को अणुओं में DNA प्रति संख्या कैलकुलेटर से बदलें।