आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशाला की गणनाएँ: अध्ययन गाइड

मुख्य विचार

आण्विक जीव विज्ञान की मेज़ कुछ गिनी-चुनी गणनाओं पर चलती है: नली में कितना DNA है, उसे कैसे तनु करें, कितना इन्सर्ट जोड़ें, और प्राइमर किस ताप पर जुड़ता है।

• A₂₆₀ = 1 पर द्विसूत्री DNA लगभग 50 µg/mL है। तनुकरण गुणक से गुणा करें, और RNA के लिए 40 तथा एकसूत्री DNA के लिए 33 से।
• छोटे प्राइमरों के लिए वैलेस नियम Tm = 2 × (A + T) + 4 × (G + C) है, °C में। युग्म के कम Tm से कुछ अंश नीचे एनीलन करें।
• लाइगेशन के लिए इन्सर्ट का द्रव्यमान = मोलर अनुपात × वेक्टर का द्रव्यमान × (इन्सर्ट की लंबाई ÷ वेक्टर की लंबाई)।
• क्रमिक तनुकरण गुणकों को गुणा करता है, इसलिए तीन 1:10 चरण 1:1000 देते हैं। प्रतियों की संख्या = द्रव्यमान × 6.022 × 10²³ ÷ (लंबाई × 660 × 10⁹), द्रव्यमान नैनोग्राम में।

मुख्य समीकरण

• conc (µg/mL) = A₂₆₀ × 50 × dilution
• Tm = 2(A+T) + 4(G+C)
• insert ng = ratio × vector ng × insert length ÷ vector length
• copies = mass × 6.022×10²³ ÷ (length × 660 × 10⁹)

हल किया हुआ उदाहरण

DNA नमूने का 1:10 तनुकरण A₂₆₀ = 0.50 पढ़ता है, इसलिए मूल घोल 0.50 × 50 × 10 = 250 µg/mL है। 10 A या T और 10 G या C वाले 20-mer प्राइमर का Tm = 2 × 10 + 4 × 10 = 60 °C है। 50 ng पर 3 kb के वेक्टर और 3:1 मोलर अनुपात पर 1 kb के इन्सर्ट के लिए इन्सर्ट = 3 × 50 × (1 ÷ 3) = 50 ng।

आम गलतियाँ

• A₂₆₀ पाठ्यांक को सांद्रता में बदलते समय तनुकरण गुणक भूल जाना।
• मोलर अनुपात माँगे जाने पर द्रव्यमान अनुपात लगाना।
• लंबे प्राइमरों के लिए वैलेस नियम लगाना, जहाँ लवण-संशोधित सूत्र चाहिए।

अभ्यास

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