لماذا المحاليل الأصلية
المحلول الأصلي (stock) محلول مركز يُخفَّف عند الحاجة. وزن بضعة مليغرامات بدقة لكل دفعة وسط أمر صعب؛ أما وزن غرام واحد مرة لمحلول أصلي مركز فسهل، وإضافة حجم ثابت منه سريعة وقابلة للتكرار. والمحاليل الأصلية المركزة تدوم أيضًا مدة أطول وتشغل مساحة أقل في المجمّد.
الترميز ×
المحلول الأصلي 1000× أكثر تركيزًا بألف مرة من تركيز العمل، فيُخفَّف 1:1000: 1 µL من المحلول الأصلي لكل mL من المحلول النهائي. وتعمل المحاليل 10× و100× بالطريقة نفسها.
مثال محلول: الأمبيسيلين
تستخدم أطباق LB الأمبيسيلين بتركيز 100 µg/mL.
- المحلول الأصلي 1000×: 100 µg/mL × 1000 = 100 mg/mL.
- لـ 10 mL من المحلول الأصلي، أذب 100 mg/mL × 10 mL = 1 g من الأمبيسيلين في الماء وعقّمه بالترشيح.
- لـ 500 mL من الآغار، أضف 500 ÷ 1000 = 0.5 mL، أي 500 µL من المحلول الأصلي، بعد أن يبرد الآغار إلى نحو 50 إلى 55 °C.
تراكيز العمل الشائعة للمضادات الحيوية
- الأمبيسيلين والكاربينيسيلين: 100 µg/mL (محاليل أصلية في الماء)
- الكاناميسين: 50 µg/mL (الماء)
- السبيكتينوميسين: 50 µg/mL (الماء)
- الكلورامفينيكول: 25 µg/mL (الإيثانول)
- التتراسيكلين: 10 µg/mL (الإيثانول، محميًا من الضوء)
هذه قيم شائعة؛ اتبع بروتوكولك حين يختلف.
حفظ المحاليل الأصلية
قسّم المحاليل الأصلية إلى أجزاء، وعلّمها بالاسم والتركيز والتاريخ، واحفظها عند −20 °C. أذب جزءًا واحدًا في كل مرة بدلًا من إعادة تجميد الأنبوب نفسه مرة بعد مرة.
الحاسبات
تعطي حاسبة المحاليل الأصلية الكتلة التي توزن والحجم الذي يُضاف لأي محلول أصلي ×. وللتخفيفات الأخرى استخدم حاسبة التخفيف، وللمحاليل الأصلية المولية حاسبة المولارية.
مخزونات مختبرية شائعة
| المخزون | لـ 500 mL | ملاحظات |
|---|---|---|
| Tris 1 M، pH 8.0 | 60.6 g من Tris base | اضبط الـ pH بـ HCl قبل الإكمال إلى العلامة |
| NaCl 5 M | 146.1 g | يذوب ببطء؛ حرّك مع تسخين خفيف |
| EDTA 0.5 M، pH 8.0 | 93.1 g من ثنائي الصوديوم ثنائي الهيدرات | لا يذوب حتى يُرفع الـ pH إلى قرب 8 |
| SDS 10% | 50 g | احفظه في حرارة الغرفة؛ يترسب في البرد |
الإذابة والتعقيم
أضف نحو 80% من الحجم النهائي من الماء، وأذب، واضبط الـ pH إن لزم، وأكمل حتى العلامة. عقّم بالأوتوكلاف ما يتحمل الحرارة؛ وعقّم بالترشيح المضادات الحيوية والإنزيمات وكل ما يتحلل، بمرشح 0.22 µm.
مشكلات شائعة
- لا يذوب. يحتاج EDTA pH عاليًا، وبعض المركبات تحتاج DMSO أو إيثانول. تحقق من الذوبانية قبل وزن كمية كبيرة.
- بلورات بعد الحفظ في البرد. يترسب SDS وبعض الأملاح عند 4 °C. دفّئ العبوة واخلط حتى يصبح شفافًا قبل الاستخدام، واحفظ SDS في حرارة الغرفة.
- محلول العمل منحرف قليلًا. إضافة 1 mL من مخزون 1000× إلى 1 L تعطي 1,001 mL. وللعمل الدقيق، أكمل إلى الحجم النهائي بدل الإضافة فوقه.
- المخزون يفقد قوته. يتحلل الأمبيسيلين في المحلول خلال أسابيع عند 4 °C، والتتراسيكلين يتلفه الضوء. جمّد حصصًا واحفظ المخزونات الحساسة للضوء ملفوفة بورق الألومنيوم.