ما IC50
IC50 (التركيز المثبط النصفي) هو تركيز دواء أو مثبط يخفض استجابة، مثل النشاط الإنزيمي أو حيوية الخلايا، إلى منتصف المسافة بين مستوييها الأعلى والأدنى. وللاستجابة التي ترتفع مع التركيز، تسمى النقطة نفسها EC50.
تصميم التجربة
- اختبر من 8 إلى 12 تركيزًا متباعدة بالتساوي على مقياس لوغاريتمي، مثل خطوات 3 أو 10، لتحصل على نقاط في الهضبتين وفي المنتصف.
- أضف ضابطًا غير معالَج (100%) وضابطًا للتثبيط الكامل أو للخلفية (0%).
- قِس كل تركيز بمكررات.
معايرة البيانات
حوّل كل قراءة إلى نسبة مئوية من الضابطين:
% الاستجابة = (القراءة − الخلفية) ÷ (غير المعالَج − الخلفية) × 100
ملاءمة المنحنى
تكوّن بيانات الجرعة والاستجابة منحنى على شكل S مقابل لوغاريتم التركيز، يُلاءَم بالنموذج اللوجستي رباعي المعاملات:
الاستجابة = الأدنى + (الأعلى − الأدنى) ÷ (1 + 10(log IC50 − log التركيز) × ميل هِل)
تجد الملاءمة الهضبتين العليا والسفلى، وIC50 عند نقطة المنتصف، وميل هِل الذي يصف مدى انحداره. إن لم تصل بياناتك إلى هضبة، فتثبيت الأعلى عند 100 والأدنى عند 0 بعد المعايرة يعطي ملاءمة أثبت.
قراءة النتيجة
- IC50: القيمة الأصغر تدل على مركب أقوى.
- ميل هِل: قرب −1 في منحنى هابط بسيط. الميول الأشد أو الألطف كثيرًا تستحق نظرة ثانية.
- R² والرسم: يجب أن يمر المنحنى بين النقاط دون نمط منهجي من الانحرافات.
- IC50 خارج المدى المختبَر استقراء، ويستحسن تأكيده بتراكيز أكثر.
الحاسبات
تلائم حاسبة IC50 المنحنى رباعي المعاملات مع مكرراتك، وترسمه وتعطي IC50 أو EC50، وميل هِل، والهضبتين، وR². خطّط للتراكيز بـ حاسبة التخفيفات المتسلسلة.