Temel fikirler
Bakteriler, kültür seyreltilip koloniler sayılarak sayılır ve ikiye bölünerek büyür. Birkaç formül plak sayımlarını derişime, büyüme eğrilerini üreme sürelerine çevirir.
- KOB/mL = sayılan koloni ÷ (seyreltme çarpanı × ekilen hacim mL cinsinden). Yaklaşık 30 ile 300 koloni içeren plakları sayın.
- Seri seyreltmede çarpanlar çarpılır: on katlık üç adım 10⁻³ verir.
- Üreme sayısı n = log₂(N ÷ N₀), üreme süresi g = geçen süre ÷ n’dir.
- Üstel büyümenin büyüme sabiti k = ln 2 ÷ g’dir ve N = N₀ × 2ⁿ, n üremeden sonraki sayıyı verir.
Temel denklemler
CFU/mL = colonies ÷ (dilution × volume plated)n = log₂(N ÷ N₀)g = t ÷ nk = ln 2 ÷ gtotal dilution = product of the steps
Çözümlü örnek
10⁻⁶ seyreltmesinden 0,1 mL ekilen bir plakta 150 koloni varsa kültür 150 ÷ (10⁻⁶ × 0,1) = 1,5 × 10⁹ KOB/mL içerir. 2 saatte 1 × 10⁵’ten 1,6 × 10⁶ hücreye çıkan bir kültür log₂(16) = 4 üreme geçirmiştir; yani g = 120 ÷ 4 = 30 dk’dır.
Sık yapılan hatalar
- Çoğu kez 1 mL değil 0,1 mL olan ekilen hacme bölmeyi unutmak.
- Çok az ya da çok fazla koloni içeren plakları kullanmak; bu, gürültülü veya sıkışık sayımlar verir.
- Üreme sayısı için ln 2’ye bölmeden doğal logaritma kullanmak.
Alıştırma
Bu konudaki alıştırma sorularıyla kendinizi sınayın: Mikrop büyümesi ve sayımı