كيف تجري تخفيفًا متسلسلًا

ما التخفيف المتسلسل

التخفيف المتسلسل سلسلة من التخفيفات يُحضَّر فيها كل أنبوب من الذي قبله. يتيح الوصول إلى تخفيفات كبيرة جدًا، مثل واحد في المليون، بأحجام يسهل سحبها بالماصة، ويعطي سلسلة من التراكيز المتباعدة بالتساوي للمنحنيات القياسية والعد على الأطباق.

كيف تجري تخفيفًا متسلسلًا 1:10

1. علّم الأنابيب وأضف 900 µL من المخفِّف (ماء أو محلول منظِّم أو وسط) إلى كل منها.
2. أضف 100 µL من العينة إلى الأنبوب الأول وامزج جيدًا بالماصة أو بالخلاط الدوامي. هذا الأنبوب تخفيف 1:10 ‏(10⁻¹).
3. برأس جديد، انقل 100 µL من الأنبوب الأول إلى الثاني وامزج. هذا 10⁻².
4. كرر على طول الصف. كل أنبوب أخف بعشر مرات من الذي قبله.

لسلسلة تخفيفات 1:2، المستخدمة في المنحنيات القياسية ومعايرة الأجسام المضادة، امزج أحجامًا متساوية، مثلًا 500 µL من الأنبوب السابق في 500 µL من المخفِّف.

كيف تحسب التخفيف الكلي

معامل التخفيف لخطوة واحدة هو الحجم الكلي ÷ الحجم المنقول: (100 + 900) ÷ 100 = 10. والتخفيف الكلي لأنبوب هو حاصل ضرب معاملات كل الخطوات، فالأنبوب السادس في سلسلة 1:10 مخفف 10⁶ مرة. وتركيزه هو التركيز الأولي ÷ 10⁶.

عد المستعمرات من تخفيف

ازرع حجمًا معلومًا من عدة أنابيب وعدّ الطبق الذي فيه بين 30 و300 مستعمرة. عندئذٍ:

CFU لكل mL = المستعمرات × التخفيف الكلي ÷ الحجم المزروع (mL)

45 مستعمرة من 0.1 mL من الأنبوب 10⁻⁶ تعطي 45 × 10⁶ ÷ 0.1 = 4.5 × 10⁸ CFU/mL في العينة الأصلية.

نصائح للتخفيف بدقة

• غيّر الرأس بين الأنابيب؛ السائل المحمول يضيف خطأ يكبر على طول السلسلة.
• امزج كل أنبوب جيدًا قبل النقل التالي.
• اسحب أحجامًا في منتصف مدى الماصة، لا عند حدها الأدنى.

الحاسبات

تبين حاسبة التخفيفات المتسلسلة تركيز كل أنبوب وكم تنقل وكم تضيف. ولتخفيف واحد، استخدم حاسبة التخفيف؛ ولعدّ الخلايا قبل التخفيف، حاسبة عدّاد الكريات.