Seri seyreltme nasıl yapılır

Seri seyreltme nedir

Seri seyreltme, her tüpün bir öncekinden yapıldığı bir seyreltmeler zinciridir. Milyonda bir gibi çok büyük seyreltmelere pipetlemesi kolay hacimlerle ulaşır ve standart eğriler ile plaka sayımları için eşit aralıklı bir derişimler takımı verir.

1:10’luk seri seyreltme nasıl yapılır

1. Tüpleri etiketle ve her birine 900 µL seyreltici (su, tampon ya da besiyeri) ekle.
2. İlk tüpe 100 µL örnek ekle ve pipetleyerek ya da vortekslerek iyice karıştır. Bu tüp 1:10 (10⁻¹) seyreltmedir.
3. Yeni bir uçla ilk tüpten ikinciye 100 µL aktar ve karıştır. Bu 10⁻²’dir.
4. Sıra boyunca tekrarla. Her tüp bir öncekinden on kat zayıftır.

Standart eğriler ve antikor titrasyonları için kullanılan iki katlık bir seri için bunun yerine eşit hacimleri karıştır; örneğin önceki tüpten 500 µL’yi 500 µL seyrelticiye.

Toplam seyreltmeyi hesaplamak

Bir adımın seyreltme katsayısı toplam hacim ÷ aktarılan hacimdir: (100 + 900) ÷ 100 = 10. Bir tüpün toplam seyreltmesi adım katsayılarının çarpımıdır; yani 1:10’luk bir serinin altıncı tüpü 10⁶ kez seyreltilmiştir. Derişimi başlangıç derişimi ÷ 10⁶’dır.

Bir seyreltmeden koloni saymak

Birkaç tüpten bilinen bir hacmi ek ve 30–300 koloni içeren plakayı say. Sonra:

mL başına KOB = koloni × toplam seyreltme ÷ ekilen hacim (mL)

10⁻⁶ tüpünün 0,1 mL’sinden 45 koloni, özgün örnekte 45 × 10⁶ ÷ 0,1 = 4,5 × 10⁸ KOB/mL verir.

Doğru seyreltmeler için ipuçları

• Tüpler arasında uç değiştir; taşınan sıvı seri boyunca büyüyen bir hata ekler.
• Bir sonraki aktarımı almadan önce her tüpü iyice karıştır.
• Hacimleri pipetin en küçük ayarında değil, aralığının ortasında pipetle.

Hesaplayıcılar

Seri seyreltme hesaplayıcı her tüpün derişimini ve ne kadar aktarılıp ekleneceğini listeler. Tek bir seyreltme için Seyreltme hesaplayıcıyı, seyreltmeden önce hücre saymak için Hemositometre hesaplayıcıyı kullan.