Что такое серийное разведение
Серийное разведение — цепочка разведений, где каждая пробирка готовится из предыдущей. Оно позволяет достичь очень больших разведений, например одного на миллион, с объёмами, которые легко отбирать пипеткой, и даёт набор равномерно отстоящих концентраций для калибровочных кривых и подсчёта на чашках.
Как сделать серийное разведение 1:10
- Подпишите пробирки и внесите в каждую 900 мкл разбавителя (воды, буфера или среды).
- Добавьте 100 мкл образца в первую пробирку и хорошо перемешайте пипетированием или на вортексе. Эта пробирка — разведение 1:10 (10−1).
- Новым наконечником перенесите 100 мкл из первой пробирки во вторую и перемешайте. Это 10−2.
- Повторяйте по ряду. Каждая пробирка в десять раз слабее предыдущей.
Для двукратного ряда, который используют для калибровочных кривых и титрования антител, смешивайте равные объёмы, например 500 мкл предыдущей пробирки с 500 мкл разбавителя.
Расчёт общего разведения
Коэффициент одного шага — общий объём ÷ перенесённый объём: (100 + 900) ÷ 100 = 10. Общее разведение пробирки — произведение коэффициентов всех шагов, так что шестая пробирка ряда 1:10 разведена в 106 раз. Её концентрация — начальная концентрация ÷ 106.
Подсчёт колоний по разведению
Высейте известный объём из нескольких пробирок и посчитайте чашку с 30–300 колониями. Затем:
КОЕ на мл = колонии × общее разведение ÷ высеянный объём (мл)
45 колоний из 0,1 мл пробирки 10−6 дают 45 × 106 ÷ 0,1 = 4,5 × 108 КОЕ/мл в исходном образце.
Советы для точных разведений
- Меняйте наконечники между пробирками; перенесённая жидкость добавляет ошибку, которая растёт по ряду.
- Тщательно перемешивайте каждую пробирку перед следующим переносом.
- Отбирайте объёмы в середине диапазона пипетки, а не на минимальной настройке.
Калькуляторы
Калькулятор серийных разведений показывает концентрацию каждой пробирки и сколько переносить и добавлять. Для одного разведения используйте Калькулятор разведения, а чтобы посчитать клетки перед разведением, — Калькулятор камеры Горяева.