Формула
Фактор разведения показывает, во сколько раз разбавлен образец:
фактор разведения = общий объём ÷ объём образца = исходная концентрация ÷ конечная концентрация
10 мкл образца, доведённые буфером до 100 мкл, — это 100 ÷ 10 = фактор разведения 10. Разведение стока 5 мг/мл до 0,5 мг/мл — тоже фактор 10.
Что означает 1:10
Записанное как отношение, 1:10 обычно означает 1 часть образца на 10 частей всего (фактор 10), но некоторые читают это как 1 часть образца плюс 10 частей разбавителя (фактор 11). Разница — 10%. Формулировки «1 в 10» или «в 10 раз» однозначны; когда пишете протокол сами, указывайте объёмы.
Серийные разведения перемножаются
В серийном разведении каждый шаг делают из предыдущей пробирки, и факторы перемножаются. Три шага 1:10 дают 10 × 10 × 10 = 1000, записывается 10−3. Два шага 1:2 и один 1:5 дают 2 × 2 × 5 = 20. Так точно делают разведение 1:1 000 000, не отмеряя микролитр в литр.
Возврат к исходной концентрации
Умножьте измеренное на общий фактор разведения. Чашка из пробирки 10−4 со 120 колониями из 100 мкл означает 120 ÷ 0,1 мл × 10 000 = 1,2 × 107 КОЕ/мл в исходной культуре. В камере Горяева клетки, смешанные 1:1 с трипановым синим, имеют фактор 2, а образец, до этого разведённый 1:5, — общий фактор 10.
Объёмы для нужного фактора
Для фактора F в конечном объёме V возьмите V ÷ F образца, остальное — разбавитель. Разведение 1:40 в 200 мкл — это 5 мкл образца и 195 мкл буфера. Факторы больше примерно 20 за один шаг означают пипетирование крошечных объёмов, поэтому разбивайте их на два шага.
Калькуляторы
Калькулятор разведения решает C1V1 = C2V2 относительно любого из четырёх значений. Калькулятор серийных разведений планирует пробирки и объёмы для серии, а Калькулятор камеры Горяева применяет фактор разведения к подсчёту клеток.