La formule
Le facteur de dilution indique combien de fois l'échantillon a été dilué :
facteur de dilution = volume total ÷ volume d'échantillon = concentration initiale ÷ concentration finale
10 µL d'échantillon complétés à 100 µL avec du tampon donnent 100 ÷ 10 = un facteur de dilution de 10. Diluer une solution mère à 5 mg/mL jusqu'à 0,5 mg/mL est aussi un facteur 10.
Ce que veut dire 1:10
Écrit comme un rapport, 1:10 signifie en général 1 part d'échantillon dans 10 parts au total (facteur 10), mais certains le lisent comme 1 part d'échantillon plus 10 parts de diluant (facteur 11). Les deux diffèrent de 10 %. Les protocoles qui disent « au 1/10 » ou « 10 fois » sont sans ambiguïté ; quand vous en écrivez un, donnez les volumes.
Les dilutions en série se multiplient
Dans une dilution en série, chaque étape est faite à partir du tube précédent, et les facteurs se multiplient. Trois étapes au 1/10 donnent 10 × 10 × 10 = 1 000, noté 10−3. Deux étapes au 1/2 et une au 1/5 donnent 2 × 2 × 5 = 20. C'est ainsi qu'on fait avec précision une dilution au 1/1 000 000 sans pipeter un microlitre dans un litre.
Remonter à l'origine
Multipliez la mesure par le facteur de dilution total. Une boîte issue du tube 10−4 avec 120 colonies à partir de 100 µL signifie 120 ÷ 0,1 mL × 10 000 = 1,2 × 107 ufc/mL dans la culture d'origine. À l'hématimètre, des cellules mélangées à parts égales avec du bleu trypan ont un facteur 2, et un échantillon dilué au 1/5 avant cela a un facteur total de 10.
Trouver les volumes pour un facteur donné
Pour un facteur F dans un volume final V, prenez V ÷ F d'échantillon et complétez avec du diluant. Une dilution au 1/40 dans 200 µL, c'est 5 µL d'échantillon et 195 µL de tampon. Les facteurs au-delà d'environ 20 en une seule étape imposent de pipeter des volumes minuscules ; répartissez-les sur deux étapes.
Outils
Calcul de dilution résout C1V1 = C2V2 pour n'importe laquelle des quatre valeurs. Calcul de dilution en série planifie les tubes et les volumes d'une série, et Calcul avec hématimètre applique le facteur de dilution à un comptage de cellules.