A fórmula
O fator de diluição é quantas vezes a amostra ficou mais diluída:
fator de diluição = volume total ÷ volume da amostra = concentração inicial ÷ concentração final
10 µL de amostra completados até 100 µL com tampão são 100 ÷ 10 = um fator de diluição de 10. Diluir um estoque de 5 mg/mL para 0,5 mg/mL também é um fator de 10.
O que 1:10 significa
Escrito como razão, 1:10 normalmente significa 1 parte de amostra em 10 partes totais (fator 10), mas algumas pessoas leem como 1 parte de amostra mais 10 partes de diluente (fator 11). Os dois diferem em 10%. Protocolos que dizem "1 em 10" ou "10 vezes" não são ambíguos; ao escrever um, informe os volumes.
Diluições seriadas se multiplicam
Numa diluição seriada cada etapa é feita a partir do tubo anterior, e os fatores se multiplicam. Três etapas 1:10 dão 10 × 10 × 10 = 1.000, escrito 10−3. Duas etapas 1:2 e uma 1:5 dão 2 × 2 × 5 = 20. É assim que uma diluição 1:1.000.000 é feita com precisão sem pipetar um microlitro em um litro.
Voltando ao original
Multiplique o que você mediu pelo fator de diluição total. Uma placa do tubo 10−4 com 120 colônias a partir de 100 µL significa 120 ÷ 0,1 mL × 10.000 = 1,2 × 107 ufc/mL na cultura original. No hemocitômetro, células misturadas 1:1 com azul de tripan têm fator 2, e uma amostra diluída 1:5 antes disso tem fator total 10.
Encontrando os volumes para um fator desejado
Para um fator F num volume final V, use V ÷ F de amostra e o resto de diluente. Uma diluição 1:40 em 200 µL são 5 µL de amostra e 195 µL de tampão. Fatores acima de uns 20 numa etapa só exigem pipetar volumes minúsculos, então divida-os em duas etapas.
Calculadoras
A Calculadora de diluição resolve C1V1 = C2V2 para qualquer um dos quatro valores. A Calculadora de diluição seriada planeja os tubos e volumes de uma série, e a Calculadora de hemocitômetro aplica o fator de diluição a uma contagem de células.