একটি ক্রমিক লঘুকরণ কী
একটি ক্রমিক লঘুকরণ হলো লঘুকরণের একটি শিকল, যেখানে প্রতিটি নল তার আগেরটি থেকে বানানো। তা পিপেট করা সহজ আয়তন নিয়েই খুব বড় লঘুকরণে পৌঁছায়, যেমন দশ লাখে এক, আর আদর্শ বাঁক ও প্লেটের গোনার জন্য সমানভাবে ছড়ানো ঘনমাত্রার একটি গুচ্ছ দেয়।
একটি 1:10 ক্রমিক লঘুকরণ কীভাবে করবেন
- নলগুলোয় নাম লিখে প্রত্যেকটিতে 900 µL লঘুকারক (পানি, বাফার কিংবা মাধ্যম) দিন।
- প্রথম নলে নমুনার 100 µL দিয়ে পিপেট করে কিংবা ভর্টেক্স করে ভালোভাবে মিশিয়ে নিন। এই নলটি একটি 1:10 (10−1) লঘুকরণ।
- একটি নতুন ডগা নিয়ে প্রথম নল থেকে দ্বিতীয়টিতে 100 µL সরিয়ে মিশিয়ে নিন। এটি 10−2।
- সারি ধরে এভাবেই চালিয়ে যান। প্রতিটি নল তার আগেরটির চেয়ে দশগুণ দুর্বল।
আদর্শ বাঁক আর অ্যান্টিবডি টাইট্রেশনে ব্যবহার করা দ্বিগুণের একটি ধারার জন্য বদলে সমান আয়তন মেশান, যেমন 500 µL লঘুকারকে আগের নলের 500 µL।
মোট লঘুকরণ বের করা
একটি ধাপের লঘুকরণের গুণক হলো মোট আয়তন ÷ সরানো আয়তন: (100 + 900) ÷ 100 = 10। একটি নলের মোট লঘুকরণ হলো ধাপের গুণকগুলো একসঙ্গে গুণ করা, তাই একটি 1:10 ধারার ষষ্ঠ নল 106 গুণ লঘু। তার ঘনমাত্রা হলো শুরুর ঘনমাত্রা ÷ 106।
একটি লঘুকরণ থেকে কলোনি গোনা
কয়েকটি নল থেকে জানা একটি আয়তন প্লেট করুন আর 30 থেকে 300 কলোনিওয়ালা প্লেটটি গুনুন। তারপর:
প্রতি mL-এ CFU = কলোনি × মোট লঘুকরণ ÷ প্লেট করা আয়তন (mL)
10−6 নলের 0.1 mL থেকে 45 কলোনি দেয় 45 × 106 ÷ 0.1 = মূল নমুনায় 4.5 × 108 CFU/mL।
নিখুঁত লঘুকরণের টুকরো পরামর্শ
- নলের মাঝে ডগা বদলে নিন; সঙ্গে চলে আসা তরল ভুল জোড়ে, যা ধারা ধরে বেড়েই চলে।
- পরের বারটি তুলে নেওয়ার আগে প্রতিটি নল পুরোপুরি মিশিয়ে নিন।
- পিপেটের পরিসরের মাঝামাঝি আয়তনেই পিপেট করুন, তার সবচেয়ে ছোট সেটিংয়ে নয়।
হিসাব
ক্রমিক লঘুকরণের হিসাব প্রতিটি নলের ঘনমাত্রা আর কতটা সরাতে ও কতটা জুড়তে হবে তা সাজিয়ে দেয়। একটিমাত্র লঘুকরণের জন্য লঘুকরণের হিসাব ব্যবহার করুন; লঘু করার আগে কোষ গুনতে হিমোসাইটোমিটারের হিসাব ব্যবহার করুন।