সূত্রটি
লঘুকরণের গুণক হলো নমুনাটি কত গুণ বেশি লঘু হয়ে গেছে:
লঘুকরণের গুণক = মোট আয়তন ÷ নমুনার আয়তন = শুরুর ঘনমাত্রা ÷ শেষ ঘনমাত্রা
10 µL নমুনা বাফার দিয়ে 100 µL পর্যন্ত ভরলে তা 100 ÷ 10 = 10-র একটি লঘুকরণের গুণক। একটি 5 mg/mL স্টক 0.5 mg/mL-এ লঘু করাও 10-র একটি গুণক।
1:10 মানে কী
একটি অনুপাত হিসেবে লেখা হলে 1:10 সাধারণত মোট 10 ভাগে 1 ভাগ নমুনা বোঝায় (গুণক 10), তবে কিছু মানুষ তা 1 ভাগ নমুনা আর তার সঙ্গে 10 ভাগ লঘুকারক হিসেবেও পড়েন (গুণক 11)। দুটির তফাত 10%। যে পদ্ধতি “10-তে 1” কিংবা “10 গুণ” বলে তা স্পষ্ট; আপনি একটি লেখার সময় আয়তনগুলোই দিন।
ক্রমিক লঘুকরণে গুণ হয়
একটি ক্রমিক লঘুকরণে প্রতিটি ধাপ আগের নল থেকে বানানো হয়, আর গুণকগুলো গুণ হয়। 1:10-র তিনটি ধাপ দেয় 10 × 10 × 10 = 1,000, যা লেখা হয় 10−3। 1:2-র দুটি আর 1:5-র একটি ধাপ দেয় 2 × 2 × 5 = 20। একটি লিটারে এক মাইক্রোলিটার পিপেট না করেই এভাবেই একটি 1:1,000,000 লঘুকরণ নিখুঁতভাবে বানানো হয়।
মূলটিতে ফিরে যাওয়া
আপনি যা মেপেছেন তা মোট লঘুকরণের গুণক দিয়ে গুণ করুন। 10−4 নলের 100 µL থেকে 120 কলোনিওয়ালা একটি প্লেট মানে মূল চাষে 120 ÷ 0.1 mL × 10,000 = 1.2 × 107 cfu/mL। একটি হিমোসাইটোমিটারে ট্রিপ্যান ব্লুর সঙ্গে 1:1 মেশানো কোষের গুণক 2, আর তার আগে 1:5 লঘু করা একটি নমুনার মোট গুণক 10।
একটি লক্ষ্য গুণকের জন্য আয়তন খোঁজা
V শেষ আয়তনে F একটি গুণকের জন্য V ÷ F নমুনা আর বাকিটা লঘুকারক নিন। 200 µL-এ একটি 1:40 লঘুকরণ মানে 5 µL নমুনা আর 195 µL বাফার। এক ধাপে প্রায় 20-র ওপরের গুণক মানে খুদে আয়তন পিপেট করা, তাই সেগুলো দুটি ধাপে ভেঙে নিন।
হিসাব
লঘুকরণের হিসাব চারটি মানের যেকোনো একটির জন্য C1V1 = C2V2 কষে দেয়। ক্রমিক লঘুকরণের হিসাব একটি ধারার জন্য নল আর আয়তন সাজিয়ে দেয়, আর হিমোসাইটোমিটারের হিসাব একটি কোষ গোনায় লঘুকরণের গুণকটি বসিয়ে দেয়।