الصيغة
معامل التخفيف هو عدد المرات التي خُففت بها العينة:
معامل التخفيف = الحجم الكلي ÷ حجم العينة = التركيز الأولي ÷ التركيز النهائي
10 µL من العينة مكمّلة إلى 100 µL بالمحلول المنظم تعطي 100 ÷ 10 = معامل تخفيف 10. وتخفيف محلول مخزون من 5 mg/mL إلى 0.5 mg/mL معامله 10 أيضًا.
ما معنى 1:10
مكتوبًا كنسبة، يعني 1:10 عادةً جزءًا واحدًا من العينة في 10 أجزاء كلية (معامل 10)، لكن بعض الناس يقرؤونه جزءًا من العينة زائد 10 من المخفف (معامل 11). والفرق 10%. البروتوكولات التي تقول «1 في 10» أو «10 أضعاف» ليست ملتبسة؛ وحين تكتب واحدًا، اذكر الأحجام.
التخفيفات المتسلسلة تتضاعف
في التخفيف المتسلسل تُحضّر كل خطوة من الأنبوب السابق وتُضرب المعاملات. ثلاث خطوات 1:10 تعطي 10 × 10 × 10 = 1,000، وتُكتب 10−3. وخطوتان 1:2 وواحدة 1:5 تعطي 2 × 2 × 5 = 20. هكذا يُحضّر تخفيف 1:1,000,000 بدقة دون سحب ميكرولتر واحد إلى لتر.
العودة إلى الأصل
اضرب القياس في معامل التخفيف الكلي. طبق من الأنبوب 10−4 فيه 120 مستعمرة من 100 µL يعني 120 ÷ 0.1 mL × 10,000 = 1.2 × 107 cfu/mL في المزرعة الأصلية. وفي عدّاد الكريات، الخلايا المخلوطة 1:1 مع أزرق التريبان معاملها 2، والعينة المخففة 1:5 قبل ذلك معاملها الكلي 10.
إيجاد الأحجام لمعامل معيّن
لمعامل F في حجم نهائي V، استخدم V ÷ F من العينة والباقي من المخفف. تخفيف 1:40 في 200 µL يساوي 5 µL من العينة و195 µL من المحلول المنظم. والمعاملات الأعلى من نحو 20 في خطوة واحدة تضطرك لسحب أحجام ضئيلة، فقسّمها على خطوتين.
الحاسبات
تحل حاسبة التخفيف المعادلة C1V1 = C2V2 لأي من القيم الأربع. وتخطط حاسبة التخفيفات المتسلسلة أنابيب سلسلة وأحجامها، وتطبّق حاسبة عدّاد الكريات معامل التخفيف على عدّ للخلايا.