حاسبة تركيز البروتين (A280)

كيف تحسب تركيز البروتين من A280

1. اكتب قراءة A280 ومعامل التخفيف وطول المسار الضوئي.
2. اختر مصدر معامل الامتصاص: الصق تسلسل البروتين، أو اكتب المعامل المولي والوزن الجزيئي، أو اكتب Abs 0.1%.
3. يظهر التركيز بوحدة mg/mL، وبوحدة µM حين يكون الوزن الجزيئي معروفًا.

الأسئلة الشائعة

كيف يُحسب معامل الامتصاص من التسلسل؟

بطريقة Pace et al. (1995): 5500 M⁻¹ cm⁻¹ لكل تريبتوفان، و1490 لكل تيروسين، و125 لكل سيستين (زوج سيستئينات في جسر ثنائي الكبريتيد). اختر «مختزلة» إن كانت السيستئينات حرة.

ما Abs 0.1%؟

امتصاصية محلول تركيزه 1 mg/mL عند 280 nm في خلية قياس طولها 1 cm، وهي معامل الامتصاص مقسومًا على الوزن الجزيئي. التركيز بوحدة mg/mL = A280 ÷ Abs 0.1%.

لماذا لا تعمل مع بروتيني؟

البروتينات التي لا تحتوي على تريبتوفان ولا تيروسين لا تكاد تمتص عند 280 nm. استخدم اختبارًا لونيًا مثل Bradford أو BCA، أو قِس عند 205 nm.