حاسبة ΔΔCt

كيف تحسب تغير التعبير بـ ΔΔCt

1. اكتب قيم Ct للجين المستهدف والجين المرجعي في العينتين المعالجة والضابطة. تُحسب متوسطات المكررات المتعددة المفصولة بمسافات.
2. اترك الكفاءتين عند 100% لطريقة 2^-ΔΔCt، أو اكتب الكفاءات المقيسة لاستخدام طريقة Pfaffl.
3. يظهر تغير التعبير في العينة المعالجة مقارنة بالضابطة، مع ΔCt وΔΔCt ولوغاريتم التغير للأساس 2.

الأسئلة الشائعة

ما الصيغة؟

ΔCt = Ct المستهدف − Ct المرجعي في كل عينة، وΔΔCt = ΔCt المعالجة − ΔCt الضابطة، وتغير التعبير = 2^-ΔΔCt.

متى أستخدم كفاءات البادئات؟

حين تبتعد عن 100% أو تختلف فيما بينها. نسبة Pfaffl هي E المستهدف^(Ct المستهدف الضابطة − Ct المستهدف المعالجة) ÷ E المرجعي^(Ct المرجعي الضابطة − Ct المرجعي المعالجة)، حيث E = 1 + الكفاءة. وحين تكون الاثنتان 100% تعطي النتيجة نفسها كـ 2^-ΔΔCt.

ماذا يعني تغير أقل من 1؟

أن الجين المستهدف يُعبَّر عنه في العينة المعالجة أقل من الضابطة. تغير بقيمة 0.5 يساوي log2 بقيمة −1، أي نصف التعبير.