SDS-PAGEゲルの計算

SDS-PAGEゲルの作り方

1. 分離ゲルの濃度と1枚あたりの量、濃縮ゲルの濃度と量を入力します。
2. 作るゲルの枚数を入力します。
3. 表に各層の水、アクリルアミド、Tris、SDS、APS、TEMEDの量が表示されます。APSとTEMEDは流し込む直前に最後に加えます。

よくある質問

どの組成ですか？

30%アクリルアミド/ビスのストックを使うLaemmliゲルで、分離ゲルは0.375 M Tris pH 8.8、濃縮ゲルは0.125 M Tris pH 6.8、SDSとAPSは0.1%、TEMEDは分離ゲル0.04%、濃縮ゲル0.1%です。

どの濃度を使えばよいですか？

高濃度ほど小さいタンパク質の分離に向きます。目安は、8%で約40〜200 kDa、10%で20〜150 kDa、12%で15〜100 kDa、15%で10〜70 kDaです。

1枚にどのくらいのゲルが必要ですか？

キャスティング装置とスペーサーの厚さで変わります。1.0 mmのミニゲルなら分離ゲル約5 mL、濃縮ゲル約2 mLが一般的で、1.5 mmならその約1.5倍です。

アクリルアミドは危険ですか？

重合前のアクリルアミドは神経毒です。手袋をして、ストックや固まる前のゲル溶液は注意して扱ってください。