Calcul de gel SDS-PAGE

Comment couler des gels SDS-PAGE

1. Saisissez le pourcentage du gel de séparation et la quantité par plaque, puis la même chose pour le gel de concentration.
2. Saisissez le nombre de gels à couler.
3. Le tableau donne l’eau, l’acrylamide, le Tris, le SDS, l’APS et le TEMED pour chaque couche. Ajoutez l’APS et le TEMED en dernier, juste avant de couler.

Questions fréquentes

Quelle recette est utilisée ?

Des gels de Laemmli à partir d’acrylamide/bis à 30 %, avec Tris 0,375 M pH 8,8 dans le gel de séparation et Tris 0,125 M pH 6,8 dans le gel de concentration, 0,1 % de SDS et 0,1 % d’APS. Le TEMED est à 0,04 % dans le gel de séparation et 0,1 % dans le gel de concentration.

Quel pourcentage choisir ?

Plus le pourcentage est élevé, plus il sépare les petites protéines. En gros : 8 % pour environ 40 à 200 kDa, 10 % pour 20 à 150 kDa, 12 % pour 15 à 100 kDa et 15 % pour 10 à 70 kDa.

Combien de gel faut-il par plaque ?

Cela dépend du système et de l’épaisseur des espaceurs. Un mini-gel de 1,0 mm demande environ 5 mL de gel de séparation et 2 mL de gel de concentration ; les plaques de 1,5 mm environ moitié plus.

L’acrylamide est-elle dangereuse ?

L’acrylamide non polymérisée est neurotoxique. Portez des gants et manipulez le stock et les solutions de gel non prises avec précaution.