Análise de primers de PCR
Como conferir primers de PCR
- Cole os primers um por linha, com um nome opcional antes de cada sequência, ou em FASTA.
- Defina as concentrações de primer e de sódio usadas na temperatura de fusão por vizinho mais próximo.
- Cada primer aparece com comprimento, conteúdo de GC, três temperaturas de fusão, peso molecular e os avisos que houver.
Perguntas frequentes
Qual temperatura de fusão devo usar?
A de vizinho mais próximo é a mais precisa. A fórmula básica soma 2 °C por A ou T e 4 °C por G ou C em primers curtos, com uma fórmula de GC para os mais longos; a ajustada por sal corrige pelo sódio.
O que os avisos verificam?
Comprimento fora de 18-30 bases, conteúdo de GC fora de 40-60%, nenhum G ou C na extremidade 3', mais de 3 G ou C nas últimas 5 bases, repetições de 5 ou mais bases iguais e trechos autocomplementares que podem formar grampos ou dímeros de primer.
Minha sequência é enviada?
Não. Tudo roda no seu navegador, então suas sequências nunca saem do seu dispositivo.
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