Análise de primers de PCR

Como conferir primers de PCR

1. Cole os primers um por linha, com um nome opcional antes de cada sequência, ou em FASTA.
2. Defina as concentrações de primer e de sódio usadas na temperatura de fusão por vizinho mais próximo.
3. Cada primer aparece com comprimento, conteúdo de GC, três temperaturas de fusão, peso molecular e os avisos que houver.

Perguntas frequentes

Qual temperatura de fusão devo usar?

A de vizinho mais próximo é a mais precisa. A fórmula básica soma 2 °C por A ou T e 4 °C por G ou C em primers curtos, com uma fórmula de GC para os mais longos; a ajustada por sal corrige pelo sódio.

O que os avisos verificam?

Comprimento fora de 18-30 bases, conteúdo de GC fora de 40-60%, nenhum G ou C na extremidade 3', mais de 3 G ou C nas últimas 5 bases, repetições de 5 ou mais bases iguais e trechos autocomplementares que podem formar grampos ou dímeros de primer.

Minha sequência é enviada?

Não. Tudo roda no seu navegador, então suas sequências nunca saem do seu dispositivo.