O círculo
Um mapa de plasmídeo desenha o DNA circular como um anel, numerado no sentido horário a partir da posição 1 no topo. O tamanho total aparece no meio, em pares de bases. Setas mostram os elementos e a fita: setas no sentido horário estão na fita de cima.
As partes que quase todos têm
- Origem de replicação (ori): permite que o plasmídeo se copie no hospedeiro. Origens pUC dão centenas de cópias por célula; p15A e pSC101 dão menos.
- Marcador de seleção: um gene de resistência, como AmpR (ampicilina) ou KanR (canamicina), para que só cresçam células com o plasmídeo.
- Promotor: onde começa a expressão do inserto, como T7, lac, CMV ou EF-1α. Confira se funciona no seu hospedeiro.
- Sítio múltiplo de clonagem (MCS): um trecho curto cheio de sítios de restrição únicos para colocar o inserto.
- Tags e terminadores: tags His ou FLAG, e um terminador depois do inserto.
Sítios de restrição
Os sítios mostrados no mapa costumam ser os únicos, que cortam o plasmídeo uma só vez. Para clonar, escolha dois sítios únicos no MCS que não cortem também dentro do inserto. O Resumo de restrição lista as enzimas de corte único de qualquer sequência, e o Mapa de restrição mostra onde ficam.
Veja seu próprio plasmídeo
Cole um arquivo GenBank no Visualizador de mapas de plasmídeo para desenhar seus elementos e sítios num mapa.