Der Kreis
Eine Plasmidkarte zeichnet die zirkuläre DNA als Ring, im Uhrzeigersinn nummeriert ab Position 1 oben. Die Gesamtgröße steht in der Mitte, in Basenpaaren. Pfeile zeigen Features und ihren Strang: Pfeile im Uhrzeigersinn liegen auf dem oberen Strang.
Was fast jedes Plasmid hat
- Replikationsursprung (ori): lässt das Plasmid sich im Wirt vermehren. pUC-Origins geben Hunderte Kopien pro Zelle, p15A und pSC101 weniger.
- Selektionsmarker: ein Resistenzgen wie AmpR (Ampicillin) oder KanR (Kanamycin), damit nur Zellen mit Plasmid wachsen.
- Promotor: wo die Expression des Inserts beginnt, etwa T7, lac, CMV oder EF-1α. Prüfe, ob er in deinem Wirt funktioniert.
- Multiple Klonierungsstelle (MCS): ein kurzer Abschnitt voller einzelner Schnittstellen für das Insert.
- Tags und Terminatoren: His- oder FLAG-Tags und ein Terminator nach dem Insert.
Schnittstellen
Auf der Karte stehen meist die Single-Cutter, die das Plasmid nur einmal schneiden. Zum Klonieren wählst du zwei solcher Stellen in der MCS, die nicht auch im Insert schneiden. Die Restriktionsübersicht listet Single-Cutter jeder Sequenz, die Restriktionskarte zeigt, wo sie liegen.
Dein eigenes Plasmid ansehen
Füge eine GenBank-Datei in den Plasmidkarten-Viewer ein, um ihre Features und Schnittstellen als Karte zu zeichnen.