El círculo
Un mapa de plásmido dibuja el ADN circular como un anillo, numerado en el sentido de las agujas del reloj desde la posición 1 arriba. El tamaño total aparece en el centro, en pares de bases. Las flechas muestran los elementos y su hebra: las que van en el sentido del reloj están en la hebra superior.
Las partes que tienen casi todos
- Origen de replicación (ori): permite que el plásmido se copie en el hospedador. Los orígenes pUC dan cientos de copias por célula; p15A y pSC101, menos.
- Marcador de selección: un gen de resistencia, como AmpR (ampicilina) o KanR (kanamicina), para que solo crezcan las células con el plásmido.
- Promotor: donde empieza la expresión del inserto, como T7, lac, CMV o EF-1α. Comprueba que funciona en tu hospedador.
- Sitio de clonación múltiple (MCS): un tramo corto lleno de sitios de restricción únicos para meter el inserto.
- Etiquetas y terminadores: etiquetas His o FLAG, y un terminador después del inserto.
Sitios de restricción
Los sitios que aparecen en el mapa suelen ser los únicos, que cortan el plásmido una sola vez. Para clonar, elige dos sitios únicos del MCS que no corten también dentro del inserto. El Resumen de restricción lista las enzimas de corte único de cualquier secuencia, y el Mapa de restricción muestra dónde caen.
Mira tu propio plásmido
Pega un archivo GenBank en el Visor de mapas de plásmidos para dibujar sus elementos y sitios como un mapa.